Espectrometría de masas
En pocas palabras La espectrometría de masas determina la masa de una molécula. En el certificado de análisis acredita la identidad: si la masa medida coincide con la calculada a partir de la secuencia, se trata de la sustancia esperada.
La muestra se ioniza y se separa en un campo eléctrico según la relación entre masa y carga. Para péptidos lo habitual es la ionización por electrospray, porque lleva moléculas grandes a la fase gaseosa sin destruirlas.
Identidad y pureza son dos preguntas distintas. La espectrometría de masas responde a la primera y la HPLC a la segunda. Un certificado que menciona solo una de las dos deja la otra abierta.
El método responde a una pregunta distinta de la HPLC. La cromatografía dice qué tan limpia está una muestra; la espectrometría de masas dice si es la sustancia esperada. Si la masa molecular medida coincide con la calculada a partir de la secuencia, la identidad queda confirmada.
Resulta especialmente útil ante dos fallos típicos de la síntesis. Si a la cadena le falta un eslabón, la molécula pesa exactamente la masa de ese aminoácido menos. Si quedó colgado un grupo protector, pesa lo correspondiente de más. Ambos casos se aprecian en el espectro, aunque la cromatografía no separe la desviación con nitidez.
Solo ambos métodos juntos dan una afirmación sólida. Un informe que menciona únicamente un valor de pureza deja abierta la cuestión de la identidad.